由于添加劑濃度不同、孵育時間不同、染色類型或者細胞系不同等參數(shù)的不同，實驗通常在多孔板上進行。這種方法有兩個優(yōu)點，一是能夠在一個反應(yīng)容器中設(shè)置多個不同的試驗條件，二是只需要極少量的試劑和極低數(shù)量的細胞。

但是，在實施過程中，用戶仍然可能會被不同孔和不同實驗的數(shù)量混淆。

設(shè)置多孔板實驗時，MICA自帶的Navigator工具能夠幫助預(yù)覽。包括可以在虛擬畫板上計劃并設(shè)置每一孔的掃描拼接實驗或者延時實驗（見圖1）。

在這一案例研究中使用的檢測法中， U2OS細胞或者COS7細胞被鋪在96孔板，然后培養(yǎng)一整晚的時間。在實驗過程中，活細胞分別用DRAQ5、SPY-650-DNA以及TMRE孵育15分鐘。之后，更換培養(yǎng)基，在實驗結(jié)束前使用CellEvent™孵育細胞。每孔內(nèi)加入凋亡誘導(dǎo)劑星形孢菌素（3 µM–7 µM）。

在四色caspase活性檢測法中，U2OS細胞被接種在96孔板上并在夜間生長，然后培養(yǎng)一整晚的時間。在實驗過程中，活細胞與DAPI和TMRE孵育45分鐘。之后，更換培養(yǎng)基，在實驗結(jié)束前使用CellEvent™和SiR-Tubulin孵育細胞。每孔內(nèi)加入凋亡誘導(dǎo)劑—星形孢菌素（3 µM–7 µM）。

在37℃、5% CO2和~65%濕度的環(huán)境中，按照指示的時間間隔和持續(xù)時間用MICA進行活細胞成像。使用Navigator工具設(shè)定并執(zhí)行檢測。一些實驗中會運行掃描拼接（參見視頻2）。進行掃描拼接時，研究人員使用的主要策略是“focus Map”；此外，延時實驗通過“Keep focus”來保持細胞的聚焦。

視頻 2：三色caspase活性檢測的掃描拼接片。U2OS細胞分別用核標記SPY-650-DNA（藍色）、線粒體膜電位標記TMRE（品紅）和CellEvent™（黃色）處理。加入5mM星形孢菌素以誘導(dǎo)細胞凋亡。使用20x物鏡，在明亮視野和兩種熒光通道下，12小時內(nèi)每15分鐘獲取一次2x2 FOVs（視野范圍）的掃描拼接圖像。隨著時間增加，Caspase活性增強，線粒體活性減弱。

SPY-650-DNA（標記細胞核）和CellEvent™（標記caspase 3/7活性）兩種細胞染料的量化研究揭示了在活細胞實驗中發(fā)生caspase介導(dǎo)的凋亡的細胞。細胞核的數(shù)量（此處選擇“范圍”參數(shù)做類比）說明了每張圖像中細胞的數(shù)量（同選“范圍”），可與處于凋亡過程中細胞的數(shù)量（同選“范圍”）相對應(yīng)。另一個標記，即TMRE成像過程，揭示了線粒體活性。

量化數(shù)據(jù)(如長度、寬度、面積)顯示在采集圖像下方的表格中，這些數(shù)據(jù)可被導(dǎo)出為Excel表格。獲取的圖像可以在延時成像的每一個時間點上查看，并可以與識別的ROI重疊。

三色caspase 3/7活性檢測圖（圖4）顯示，細胞核信號在開始的時候增強，之后逐漸減弱。信號增強是因為核染色劑必須與DNA結(jié)合，這一結(jié)合過程需要一定的時間。另一方面，SPY-650-DNA信號減弱是因為細胞核解體，解體現(xiàn)象見相關(guān)圖像。

其他信號要么隨時間增加而增強（CellEvent™），要么隨時間增加而減弱（TMRE）： caspase介導(dǎo)的凋亡細胞數(shù)量增加的同時激活狀態(tài)的線粒體數(shù)量減少。

Caspase活性檢測法為研究抗癌藥物提供了新的見解。為了實現(xiàn)這一目標，研究人員必須在保證高時空精準度的情況下將活細胞從凋亡細胞中區(qū)分出來。

對于統(tǒng)計上可靠的結(jié)果，增加量很有必要。這就是為什么這類實驗必須在孔板上進行，也必須進行量化研究。

MICA滿足以上全部要求。在FluoSync的幫助下，Mica可同時保證多達4種不同的熒光染料可以同時成像，不論是在單一培養(yǎng)皿上，還是在96孔板上。MICA完整的培養(yǎng)系統(tǒng)能夠培育活細胞數(shù)日，同時其自帶的基于人工智能的分析功能也有助于用戶獲得可靠的數(shù)據(jù)。